诺娃讲堂丨生产修炼秘籍之DNA提取与纯化

2015-08-02 13:09 · 诺禾致源

有不少客户送来的DNA样品检测不合格,不仅浪费了样品,还影响了项目的顺利进行。要想获得高质量的样品,离不开正确的提取与纯化方法,希望本期分享的内容能给大家带来一定的帮助。

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有不少客户送来的DNA样品检测不合格,不仅浪费了样品,还影响了项目的顺利进行。要想获得高质量的样品,离不开正确的提取与纯化方法,希望本期分享的内容能给大家带来一定的帮助。

DNA样品提取的基本步骤

材料准备—细胞裂解—DNA分离—DNA纯化—质量检测

DNA提取的方法和原理

DNA提取的方法有多种,常用的方法有:

1. CTAB法

原理:CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,并与核酸形成复合物。

2. SDS法

原理:SDS是一种阴离子去垢剂,在高温(55~65℃)条件下能裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸。

3. 其它方法

根据细胞的裂解方式不同和核酸分离纯化的方式不同又细分为许多其它方法,例如超声波法、碱裂解法、吸附材料结合法、试剂盒提取法等。

当然了,面对不同类型的组织样品,要采用相应合适的提取方法:


DNA提取注意事项    

1. 用于提取DNA的材料最好要新鲜,具体可以参考有关DNA送样标准的分享。

(传送门——https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzA5NzE1MTYwMw==&mid=208185756&idx=1&sn=fae96189d03d3e7cedf75626c9c0a441#rd)

2. 操作时要带手套和口罩、所有器皿要严格消毒、要在低温中进行、提取过程中可加入适量的DNase抑制剂。

3. 研磨量:研磨会有损失,所以要控制好研磨量,一般在50-100mg。若组织较少,不能在研钵中研磨。在研磨过程中,为了防止样品降解,要一直有液氮保护。

4. 裂解:动物组织,为了裂解充分,可使用匀浆器破碎;植物组织,裂解液中可添加2%巯基乙醇,起到保护作用。

5. 抽提:如果蛋白含量高可增加酚氯仿抽提次数。

6. 沉淀:若提取浓度较大产生絮状物时可以直接挑出。

7. 含病毒的液体材料DNA含量较少,提取前先富集。

DNA的纯化

初步提取的DNA样品往往有蛋白、色素、多糖、RNA、盐离子等杂质污染。根据不同的样品形态以及不同的杂质,要采取正确的纯化方法: