带您近距离了解RSV病毒抗原及抗体试剂

2022-04-29 13:58 · 生物探索

呼吸道合胞病毒(RSV)抗原及抗体试剂。

导语:4月初,辉瑞宣布以5.25亿美元收购ReViral公司的呼吸道合胞病毒(RSV)新型疗法,使得RSV病毒引起更多人的关注。其实从20世纪60年代起科学家就一直在研发RSV疫苗,但是六十多年的时间还是没有研发成功安全有效的疫苗。辉瑞的这一收购可能引发RSV治疗的新时代。

1 什么是RSV?

相对于流感、新冠来说,大家对RSV的关注显得微不足道,但对于婴儿和老年人来说,RSV病毒可能是致命的。根据美国疾病控制与预防中心的数据,在美国RSV病毒每年导致5.8万例5岁以下的儿童和17.7万例65岁及以上的老年人住院,其中,1.3万例老年人死亡。

呼吸道合胞病毒(RSV)属于副黏病毒科、肺病毒属的单股、负链RNA病毒。根据基因组序列RSV分为A、B两种亚型,两种亚型的毒株可同时引起传播感染,但一般只有一种亚型的毒株占主导地位。

RSV是一种包膜病毒,RSV病毒颗粒直径100-300 nm,基因组长约15.2kb,包含10个基因,编码11种蛋白质。其中两个跨膜蛋白G蛋白和F蛋白是病毒的两个主要保护性抗原。

image.png

图1 RSV RNA基因组(图源:[1])

融合蛋白(Fusion protein, F)被宿主蛋白酶切割成F1和F2两个片段后才具有活性,能引起病毒囊膜与宿主细胞膜融合,在RSV感染引发的免疫病理中起作用,是目前抗体、疫苗及其他治疗性药物研发的热点蛋白。

表面黏附糖蛋白(Attachment glycoprotein, G)主要负责对宿主细胞的附着,使RSV吸附于宿主细胞上导致感染开始。G蛋白在不同菌株间存在差异,保守性不如F蛋白高。核衣壳蛋白(Nucleoprotein, N)包裹病毒基因组,形成核蛋白复合体。

下表简单概述以上蛋白的主要功能和应用:

企业微信截图_16512124136012.png

2 RSV科研试剂的应用

RSV相关蛋白、抗体等试剂在疫苗开发、药物开发以及诊断试剂开发中的应用。

1. 在疫苗研究中的应用

全球进行中的RSV疫苗项目超过60种,类型覆盖弱毒疫苗、亚单位疫苗,病毒样颗粒疫苗等,但目前仍未有获得上市批准的RSV疫苗产品。RSV疫苗开发靶点主要为F蛋白。G蛋白因其高度变异的特性在RSV疫苗研究应用较少。义翘神州开发的RSV试剂产品可应用于疫苗开发过程中的临床前研究、临床研究及质量控制环节,比如疫苗含量检测、疫苗生物效价评估以及毒理实验研究等。

在一项DNA疫苗的递送机制的研究中,Smith及其团队利用义翘神州开发的RSV-F重组蛋白(Cat:11049-V08B)进行疫苗免疫后血清抗体滴度的检测,概述了一种高效、可耐受和安全的疫苗递送策略的临床前研究结果。Lan Zhang及其所在的Merck团队在研究更稳定的RSV融合蛋白疫苗的设计和鉴定过程中,利用义翘神州的RSV F重组蛋白进行WB检测,分析不同变异体亚单位疫苗的表达水平。Lee及其团队在开发安全有效的RSV疫苗研究中,将义翘神州的RSV-G重组蛋白(Cat:40830-V08H)用做ELISA检测的包被抗原,检测血清中RSV A2病毒特异性抗体的滴度。

2. 在药物研发中的应用

阿斯利康的Synagis(palivizumab,帕利珠单抗)是目前全球唯一获得批准的RSV感染预防药物,但其适应症也仅仅是针对高风险的早产儿,且不适用于感染后的治疗。Synagis是一种人源化的鼠单克隆抗体,通过RSV 融合蛋白阻止病毒向下呼吸道扩散。目前仍有很多单克隆抗体药物和小分子药物处于研发进程中。

在一项通过创新的生物工艺生产满足传染病领域特定治疗需求的免疫球蛋白类药物的研究中,Jacque等人开发了一种用于预防和治疗RSV的免疫球蛋白,利用义翘神州的RSV F重组蛋白(Cat:11049-V08B)制备富集抗RSV免疫球蛋白亲和色谱填料。同时在测定抗RSV的Ig的抗病毒的活性时,利用义翘神州开发的抗RSV兔单抗(Cat:11049-R009)检测经过Ig孵育后的RSV病毒感染的细胞表达的F抗原的含量,以反映抗RSV的Ig的中和效价,助力了中和活性的检测。

3. 在诊断试剂开发中的应用

RSV是免疫缺陷人群及婴幼儿严重呼吸道疾病的主要致病因子,在世界范围内发病率和死亡率都很高。早期和准确的诊断RSV对合适的治疗至关重要。

RSV抗原检测方法常用的有ELISA和免疫荧光法,而基于切向流技术的RSV抗原检测具有便携、快速、可实现床旁检测等优势。随着检测技术的发展,RSV检测方法的灵敏度和特异性也在不断提高。而抗原、抗体是免疫学检测试剂的主要生物活性组分,直接影响检测结果的特异性和灵敏度。

有文献报道Quidel公司开发的SofiaTM检测平台(Griffiths等人),以RSV N蛋白为检测靶点,检测敏感性和特异性可以达到78.6%和93.9%, BD公司开发的VeritorTM检测系统,以F蛋白为靶点,检测敏感性和特异性为81.6%和99.1%。

义翘神州开发的高质量RSV N重组蛋白和RSV F重组蛋白,可应用于RSV抗原检测试剂核心原料(抗体对)的制备和筛选,也可做为抗原检测试剂的质控品。目前,义翘神州已筛选到一对广谱识别多个RSV毒株F蛋白的抗体对,可作为RSV诊断的潜在原料(包被抗体,Cat:11049-R338;检测抗体,Cat:11049-R302)。

3 义翘产品介绍

义翘神州开发的RSV试剂产品库,涵盖A、B两种亚型,包括17种靶点蛋白、7种抗体(含一种RSV-F中和抗体)以及其它约80种产品(如试剂盒、基因等)。这些产品覆盖的毒株有strain Long、strain A2、strain 18537、RSV 9320、RSVA/Homo sapiens/USA/LA2_17/2013等。

重组蛋白数据:

▼RSV (A, strain Long) F Protein (His Tag)(Cat:40831-V08B)

image.png

图2 SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度高于95%

抗体产品数据:

▼RSV-F中和抗体(Cat:11049-R338)

image.png

图3 RSV-F中和抗体抑制RSV A-A2假病毒感染Vero细胞,IC50为0.6-2.3 µg/mL

▼抗RSV-F(A2)兔单抗(Cat:11049-R302):用于WB分析

image.png

WB推荐稀释比1:1000-1:5000 (对于重组蛋白的检测)
泳道1:RSV-F(A2)蛋白(Cat:11049-V08B)
泳道2:RSV-F(Strain RSS-2)蛋白(Cat:40037-V08B)
泳道3:RSV-F(aa 1-525)蛋白(Cat:40628-V08B)
泳道4:RSV-F(aa 1-526)蛋白(Cat:40627-V08B)
泳道5:RSV-F(A, Strain Long)蛋白(Cat:40831-V08B)
泳道6:RSV-F(B, Strain 18537)蛋白(Cat:40832-V08B)

抗原定量检测试剂盒(ELISA):

▼即用型RSV-F ELISA试剂盒(Cat:KIT11049)

image.png

线性范围:93.75-6000 pg/mL,灵敏度:40.6 pg/mL

▼经济型RSV-F ELISA配对抗体套装(Cat:SEK11049)

image.png

线性范围:125-8000 pg/mL,灵敏度:125 pg/mL

RSV-F ELISA试剂盒和抗体对可以识别如下蛋白:

RSV-F(A2)蛋白(Cat:11049-V08B)
RSV-F(Strain RSS-2)蛋白(Cat:40037-V08B)
RSV-F(aa 1-525)蛋白(Cat:40628-V08B)
RSV-F(aa 1-526)蛋白(Cat:40627-V08B)
RSV-F(A, Strain Long)蛋白(Cat:40831-V08B)
RSV-F(B, Strain18537)蛋白(Cat:40832-V08B)

1651212698512525.png

排版|文竞择

参考资料:
[1]Drysdale SB, Barr RS, Rollier CS, et al. Priorities for developing respiratory syncytial virus vaccines in different target populations. Sci. Transl. Med. 2020
[2]Smith TRF, Schultheis K, Morrow MP, et al. Development of an intradermal DNA vaccine delivery strategy to achieve single-dose immunity against respiratory syncytial virus. Vaccine. 2017
[3]Zhang L, Durr E, Galli JD, et al. Design and characterization of a fusion glycoprotein vaccine for Respiratory Syncytial Virus with improved stability. Vaccine. 2018
[4]Jacque E, Chottin C, Laubreton D, et al. Hyper-Enriched Anti-RSV Immunoglobulins Nasally Administered: A Promising Approach for Respiratory Syncytial Virus Prophylaxis. Frontiers in Immunology. 2021
[5]Lee JS, Kwon YM, Hwang HS, et al. Baculovirus-expressed virus-like particle vaccine in combination with DNA encoding the fusion protein confers protection against respiratory syncytial virus. Vaccine. 2014
[6]Griffiths C, Drews SJ, Marchant DJ, et al. Respiratory Syncytial Virus: Infection, Detection, and New Options for Prevention and Treatment. Clinical Microbiology Reviews, 2017