以前认为红细胞、粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等血细胞都属终末分化细胞，很难在体外培养生长或仅能短期培养而不能传代，近年来由于细胞培养技术的发展，已有血细胞培养成功的报道，正常血细胞在体外培养生长时间短，只有白血病细胞，血友病细胞、淋巴瘤细胞可培养成功并建立细胞系，但多半为EB病毒等致瘤病毒引起的转化细胞，（EBNA检查阳性），二甲基亚砜（DMSO）处理也可诱导这些细胞分化发生逆转，表现为正常细胞。所建立的细胞系多半为单核细胞系、B淋巴细胞系、T淋巴细胞系，只在IL-2产品问世后，T细胞才可在体外建系、建株。
血细胞可从外周血中用梯度液通过离心分层后分离获得。也可从脾脏、扁桃体、淋巴结中用机械法切碎过筛分离获得淋巴细胞，从腹腔刺激后的冲洗液中可获得大量的单核-巨噬细胞，从骨髓中可以获得前提血细胞，并可长期培养生长。加入生长因子或某些物质有利于细胞纯化并促进分化和生长繁殖，例如在淋巴细胞中加入IL-2（TCGF），可促进T细胞生长，建立T淋巴细胞系。在多发性骨髓瘤细胞（B细胞）培养中，加B细胞生长因子，可建立B细胞系；加入IL-6（或正常淋巴细胞培养48h的培养上清中的IL6）可使B细胞在体外长期培养，建立了IL-6依赖的B9细胞系。在骨髓单个核细胞培养中加入二羟基维生素D3,可使单个核细胞分化为成骨细胞及破骨细胞。
（一）外周血细胞分离：
外周血中除红细胞外，还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等，通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种：自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分离法、Ficoll分离法。
1、自然沉降法：
将无菌抗凝血放入试管中，在37℃水浴中静置，自然沉降1-2h，可见到红细胞下沉，并有明显分层，上层血浆中富含有大量的 和淋巴细胞，下层主要为红细胞。此方法简便但各层中的细胞种类多，不纯。血浆中虽以粒细胞、淋巴细胞为主，但也含有血小板，大单核细胞和少量红细胞。下层虽以红细胞为主，但也有上述各种细胞，此法适用于淋巴细胞转化试验。
2、差异沉降法：
用6%的右旋糖酐或3%的明胶溶液无菌消毒后，分装于中试管中，由于这些物质能使红细胞形成“串状”，比粒细胞、淋巴细胞沉降速度快，因而可使红细胞与白细胞、淋巴细胞分离开。其方法如下：用6%的右旋糖酐溶液5-10ml，经抗凝血5ml加入上层中混合后静置于37℃水浴中30-60min，即可见红细胞下沉，上层富含大量粒细胞和淋巴细胞，下层为红细胞，使两者易于分离开，取上层可用于粒细胞、淋巴细胞培养和实验，下层可用于红细胞培养和实验，经PBS洗3次后即可加入培养基培养，可用于天然白细胞干扰素的诱生和生产。此法分离的细胞纯度也不高。
3、氯化铵分离法：
0.83%氯化铵（NH4CL）可使红细胞破裂，通常将分离获得的粒细胞。淋巴细胞中混有的少量的红细胞用0.83%氯化铵进行裂解，以排除红细胞的干扰。另外，此法也适合大量粒细胞、淋巴细胞的分离制备，在天然白细胞干扰素诱生和生产中已被广泛应用。方法如下：
将中心血站供应的健康人外周血离心分离白细胞黄层悬液先经2000r/min离心20min，吸出上清血浆，将下层的红细胞、白细胞混合后，加入0.83氯化铵，用量为血细胞悬液液量的3倍，于4℃作用20min后离心弃去上清。
在沉淀层中再加入新鲜0.83氯化铵混匀后于4℃作用20min，以便彻底清除红细胞，离心弃上清。
收货下层的细胞用PBS洗3次后，再用含5%人AB型血清的（含100U/ml卡拉霉素）培养基制成悬液，调整细胞浓度为（8-10）x10^9个/L，分瓶加塞在37℃普通培养箱中旋转培养（12r/h）。
混悬细胞时若加入干扰素诱导剂（NDV-F）诱导22h，收货上清就可生产白细胞干扰素。此法分离的细胞纯度更差。
4、Ficoll分离法：
采用Ficoll和泛影葡胺配制而成的淋巴细胞分离液，通过2000r/min离心后可使血细胞以不同相对密度分离开，如分离淋巴细胞可选用相对密度1.077的分离液；若分离血小板可用相对密度1.090的分离液，若分离骨髓中的单核细胞常用相对密度1.120的分离液，现以淋巴细胞分离为例，方法如下。
取中心血站供应的抗凝血细胞或初步分离的白细胞黄层细胞悬液，用无钙、镁离子的PBS稀释3-4倍。
将Ficoll淋巴细胞分离液事先分装于离心管中，使其沉于管底，并在37℃中预热。
用吸管将经稀释的血细胞悬液沿离心管壁缓慢加入，不让细胞悬液冲破分层液界面，使其悬于分层液上方。
以2000r/min离心20min后，不同细胞可依相对密度不同而分布于各位置上，由于红细胞在Ficoll作用下成串下沉，故在离心管中分布在Ficoll层下方，淋巴细胞分布在Ficoll层上方。
收集浑浊带分离获得的淋巴细胞，用无钙、镁离子的PBS洗3次后，再用培养基洗1次后计数，分瓶培养。
此法分离获得淋巴细胞纯度高。
分离液的制备：9% Ficoll（20℃下相对密度约1.020）24份与33.4%泛影葡胺（用泛影钠或Conray400也可，在20℃下相对密度约1.200）10份混合后，将其相对密度调至1.077金额可获得淋巴细胞分离液，于121℃高压蒸汽灭菌30min，室温保存备用。若配制高相对密度的分离液用加入高浓度泛影葡胺来调整，若配制低相对密度的分离液用稀释的Ficoll来调整。
（二）淋巴器官中淋巴细胞的分离：
从脾脏、淋巴结、扁桃体或胸腺等器官中制备淋巴细胞悬液，在免疫学研究中是经常用到的。方法如下。
无菌取上述淋巴器官，若为扁桃体，应将扁桃体在剥离外表的结缔组织和血块后，在含高浓度抗生素的洗液中4℃浸泡2-4h，以防污染。
将淋巴器官剪成碎块，用镊子压挤碎块，或在金属丝网上研磨，用洗液冲洗，或用玻璃匀浆器研磨，制成悬液。
自然下沉10min后，吸取上层细胞悬液，弃去下层沉淀的组织块，1500r/min离心，取沉淀物，用无钙、镁离子的PBS洗2次后，混悬于培养基中，分瓶培养。
用上述分离法所获得的拎包细胞，可用于白细胞黏附移动试验、转化试验、细胞毒试验，同时可用于细胞因子的诱生和制备，或扩增外周血造血细胞、树突细胞、淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)、Tδ细胞等，供细胞移植用。
（三）人脐带血细胞分离培养：
人脐带血来源方便，采集容易，对母婴均无伤害。近年来研究表明，脐带血的血浆中富含许多高水平的造血活性物质，具有刺激和促进骨髓造血干/祖细胞增殖、分化和再植能力的功能，是造血生长因子的重要来源。
脐带血中富含类似于骨髓的造血干细胞，其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖细胞，比骨髓更原始，具有很强的自我复制和再植能力。脐带血中还含有类似于骨髓的基质细胞，对骨髓造血具有支持作用，在体外培养扩增中具有更大的增值能力，是造血干细胞的理想来源，已被应用于Fanconi贫血、某些白血病和恶性肿瘤的治疗，并容易获得骨髓造血功能的重建。
随着脐带血造血功能研究的不断深入，为体外培养和扩增脐带血干/祖细胞建立了切实可行的方法。
健康产妇于新生儿娩出后立即断脐，用含抗凝剂的采血装置无菌采集正常足月顺产儿脐带血，一般可采集50-80ml。
将脐带血用无钙、镁离子的PBS稀释2-3倍，缓慢沿壁轻轻加入含Ficoll-Hypque淋巴细胞分离液的离心管中，注意加样时切勿冲破分层界面，2500r/min离心25min。
收集单核-淋巴细胞层细胞，先用PBS洗2遍，再用培养基洗1次，活细胞计数，存活率应大于90%以上。
将分离获得的脐带血单个核细胞（MNC），浓度109个/L，用含5%AB型血清（或10%脐带血）的RPMI1640培养基，外加10mg/ml干细胞因子（SCF）、10ng/mlIL-6和IL-3、2U/mlEPO、10ng/ml的G-CSF和GM-CSF，置于37℃、5%CO2下进行培养。
每周半量换液一次，共培养5周。10天左右可传代培养，不断使脐带血中的单个核下拨进行扩增，培养5周，可使单个核细胞数增加252倍，同时了检测造血干细胞中CD34+细胞的比例，经检测，CD34+细胞增加250倍。一般脐带血中MNC体外扩增2周即可满足一个成人造血干细胞移植的需求。
若在分离获得的脐带血单个核细胞中，用含20%小牛血清的ROMI1640培养基外加二羟基维生素D3、地塞米松、维生素C等刺激物，培养1-2周后，可见有贴壁基质细胞的生长形态（呈梭形、多角形），说明脐带血中基质细胞可支持造血干细胞生长。
（四）巨噬细胞分离培养：
巨噬细胞有多种功能，是免疫应答中重要的抗原递呈细胞，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。该细胞易获得，便于培养。人巨噬细胞难以长期生长，多用作初代培养。目前所建立的无限细胞系大多来自小鼠，如P388D-1、J774A-1、RAW309、Cr-1等均以恶性化，但仍保留原有形态和吞噬功能，易于传代和脱壁分离。
巨噬细胞可来源于人胸水、腹水、血和透析液等，实验动物多从血液、肺、脾和胸腔、腹腔获取，通常预先注入刺激物后再采集，以小鼠腹腔取材法最为实用，方法如下。
实验前3天向每只小鼠腹腔注入肉汤培养基1ml。
引颈杀死小鼠，手提尾将全鼠浸入70%酒精中浸泡3-5s。
置动物于解剖台上，用针头固定四肢，剪开腹部毛皮，双手用镊子撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，切勿撕破腹膜。
用70%酒精棉球擦洗腹膜后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，使液体在腹腔内充分流动。
用针头轻轻挑起腹壁，将动物微倾向一侧，是腹腔中液体集中于针头下吸入针管内。
小心拔出头，将液体注入离心管中，1500r/min离心10min去上清，加10mlEagle MEM培养基洗2-3次后计数。
每只小鼠可产生（2-3）x10^7个细胞，其中90%为巨噬细胞，以2.5x109个/L接种培养。
为纯化巨噬细胞，去除其他白细胞，接种数小时后，待巨噬细胞预先充分贴壁，此时去除原培养基，并用Eagle液洗瓶壁1-2次，再加入新Eagle MEM培养基，置37℃、5%CO2温箱中培养。
