1、糖发酵管
成分:
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H2O) 2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12ml
蒸馏水 1000ml
pH7.4
制法:
1、葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min。
2、其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5ml 糖溶液加入于100ml培养基内,以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2~3d。迟缓反应需观察14~30d。
2、ONPG培养基
成分:
邻硝基酚β-D-半乳糖昔(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG) 60mg
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10ml
1%蛋白胨水(PH7.5) 30ml
制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5ml,用橡皮塞塞紧。
试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±1℃培养1~3h和24h观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生,则于1~3h变黄色,如无此酶则24h不变色。
3、西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分:
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4•7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
柠檬酸钠 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml
pH6.8
制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化。然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。
试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36±1℃培养4d,每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。
4、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
成分:
磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000ml
pH7.0
制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1ml,121℃高压灭菌15min。
甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性。甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30ml95%乙醇中,然后加入20ml蒸馏水。
V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~4d。哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养,加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5ml和 40%氢氧化钾溶液0.2ml,充分振摇试管,观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
5、克氏柠檬酸盐培养基
成分:
柠檬酸钠 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
单盐酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钠 5g
0.2%酚红溶液 6ml
琼脂 15g
蒸馏水 1000ml
制法:加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。
试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36±1℃培养7d,每天观察结果。阳性者培养基变为红色。
6、丙二酸钠培养基
成分:
酵母浸膏 1g
硫酸铵 2g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12ml
蒸馏水 1000ml
pH6.8
制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min。
试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于36±1℃培养48h,观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。
7、葡葡糖铵培养基
成分:
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4•7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 2g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 40ml
pH6.8
制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面。
试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20~100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注:容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果。
7、葡葡糖铵培养基
成分:
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4•7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 2g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 40ml
pH6.8
制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面。
试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20~100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注:容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果。
8、Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)
成分:
蛋白胨 2g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 0.3g
琼脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12ml
蒸馏水 1000ml
pH7.2
制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂。混匀后,分装试管,121℃高压灭菌 15min,直立凝固备用。
试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养。
9、马尿酸钠培养基
成分:
马尿酸钠 1g
肉浸液 100ml
制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线。以标志管内液面高度,高压灭菌121℃20min。
试剂:三氯化铁(FeCl3•6H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100ml中即成。
试验方法:用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀,吸取上清液 0.8ml,加入三氯化铁试剂0.2ml,立即混合均匀,经10~15min,观察结果。
结果:出现恒久之沉淀物为阳性。
10、营养明胶
成分:
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000ml
pH6.8~7.0
制法:加热溶解,校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固。复查最终pH应为6.8~7.0。
试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。
11、苯丙氨酸培养基
成分:
酵母浸膏 3g
DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g
磷酸氢二钠 1g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000ml
制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面。
试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
12、氨基酸脱羧酶试验培养基
成分:
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸馏水 1000ml
1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1ml
L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100ml
pH6.8
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸、L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,再行校正pH至6.8,对照培养基不加氨基酸,分装于灭菌的小试管内,每管0.5ml,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min。
试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±1℃培养18~24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色,对照管应为黄色.。
13、蛋白胨水(靛基质试验用)
成分:
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
pH7.4
制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min。
靛基质试剂
柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于 75ml戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25ml。
欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸 20ml。
试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d,加入柯凡克试剂约0.5ml,轻摇试管,阳性者于试剂层成深红色;或加入欧-波试剂约0.5ml,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。
14、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)
成分:
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000ml
pH7.4
制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固。
试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±1℃培养1~2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色。
注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。
15、尿素琼脂
成分:
蛋白胨 1g
氯化钠 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氢钾 2g
0.4%酚红溶液 3ml
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
20%尿素溶液 100ml
pH7.2±0.1
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,冷至50~55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液,尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1,分装于灭菌试管内,放成斜面备用。
试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果,尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
16、氰化钾(KCN)培养基
成分:
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水 1000ml
0.5%氰化钾溶液 20ml
pH7.6
制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入0.5%氰化钾溶液 2.0ml(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月,同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
17、氧化酶试验
试剂:
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.
1%α-萘酚-乙醇溶液。
试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落,加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色,阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
18、 硝酸盐培养基
成分:
硝酸钾 0.2g
蛋白 5g
蒸馏水 1000ml
pH7.4
制法:溶解,校正pH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂:
甲液:将对氨基苯磺酸 0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
试验方法:接种后在36±1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果:硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
19、 细胞色素氧化酶试验
试剂:
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.
1%α-萘酚-乙醇溶液。
试验方法:取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2~3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物,如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上。
结果:于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
20、过氧化氢酶试验
试剂:
3%过氧化氢溶液:临用时配制。
试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2ml,观察结果。
结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性。
21 过氧化物酶试验
试剂:2%儿茶酚溶液。
3%过氧化氢溶液。
试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30~60min,观察结果。
结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色。
注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。
22 磷酸盐缓冲液
储存液
磷酸二氢钾 34g
1mol/L氢氧化钠溶液 175mL
蒸馏水 825mL
pH7.2
制法:先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至 1000mL。
稀释液:取储存液1。25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装每瓶100mL或每管10mL,121℃高压灭菌15min。
23明胶磷酸盐缓冲液
成分:
明胶 2g
磷酸氢二钠 4g
蒸馏水 1000mL
pH6。 2
制法:加热溶解,校正pH,121℃高压灭菌15min。
24 乳酸-苯酚溶液
成分:
苯酚 10g
乳酸(比重1.21) 10g
甘油 20g
蒸馏水 10mL
制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油。
用途:检验真菌形态时用。
25 肉浸液肉汤
成分:
绞碎牛肉 500g
氯化钠 5g
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 2g
蒸馏水 1000mL
制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4~7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30min。
26肉浸液琼脂
成分:
肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL
琼脂 17~20g
制法:加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min。根据需要,倾注平板或放成斜面。
27牛肉(或牛心)消化汤
成分:
绞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氢氧化钠溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化钠 10g
蒸馏水 2000mL
制法:
1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min。
2 加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃。
3 加胰蛋白酶,氯仿,在36±1℃放置4~5h,每小时摇动一二次。
4 4h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之。若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出。
5 加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性。
6 煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜。
7 次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸。
8 校正pH7.4~7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min。
注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用。
28血消化汤
成分:
绞碎猪胃 100g
绞碎猪血块 100g
蒸馏水 1000mL
浓盐酸 10mL
制法:
1 洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎。
2 用绞肉机将猪血块绞碎。
3 将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动。
4 从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜。
5 吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2~7.4。
6 用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min。
29豆粉琼脂
成分:
牛心消化汤(PH7.4~7.6) 1000mL
琼脂 20g
黄豆粉浸液 50mL
制法:将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤。加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min。
豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。
30血琼脂
成分:
pH7.4~7.6豆粉琼脂 100mL
脱纤维羊血(或兔血) 5~10mL
制法:加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板。亦可分装灭菌试管,置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
31营养琼脂
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15~20g
蒸馏水 1000mL
制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至 7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。
32营养肉汤
成分:
蛋白陈 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min。
33 乳糖胆盐发酵管
成分:
蛋白胨 20g
猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正 pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。
注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
34乳糖发酵管
成分:
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
pH7。4
制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装 30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。
注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
②30mL 和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
35 EC肉汤
成分:
胰蛋白胨 20g
3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g
乳糖 5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min,最终pH为6.9±0.2。
36 缓冲蛋白胨水(BP)
成分:
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸氢二钠 (Na2HPO4•12H2O) 9g
磷酸二氢钾 1.5g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。
注: 本培养基供沙门氏菌前增菌用。
37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
甲液
胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾 1。6g
蒸馏水 1000mL
乙液
氯化镁(化学纯) 40g
蒸馏水 100mL
4。13.3 丙液
0。 4%孔雀绿水溶液。
制法:分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可。
注:本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。
38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
基础培养基
多胨或眎胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1000mL
碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
蒸馏水 20mL
制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL。分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL。
39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)
基础液:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 3g
碳酸钙 45g
蒸馏水 1000mL
将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至 7.0±0.1,121℃高压灭菌20min。
硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(Na2S2O3•5H2O) 50g
蒸馏水 加至100mL
碘溶液
碘片 20g
碘化钾 25g
蒸馏水加至 100mL
将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量。贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用。
煌绿水溶液
煌绿 0.5g
蒸馏水 100mL
存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。
牛胆盐溶液
干燥的牛胆盐 10g
蒸馏水 100mL
煮沸溶解,121℃高压灭菌20min。
制备:
基础液 900mL
硫代硫酸钠溶液 100mL
碘液 20mL
煌绿溶液 2mL
牛胆盐溶液 50mL
临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL。
40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
成分:
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸氢二钠 5.5g
磷酸二氢钾 4.58
L-胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1000mL
1%L-胱氨酸- 氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。
制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0±0.1。
41 GN增菌液
成分:
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
柠檬酸钠 5g
去氧胆酸钠 0.5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶225mL,115℃高压灭菌15min。
42 肠道菌增菌肉汤
成分:
蛋白胨1 10g
葡萄糖 5g
牛胆盐 20g
磷酸氢二钠 8g
磷酸二氢钾 2g
煌绿 0.015g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶30mL,115℃高压灭菌15min。
43 亚硫酸铋琼脂(BS)
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亚铁 0.3g
磷酸氢二钠 4g
煌绿 0.025g
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 6g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
pH7.5
制法:
1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。
2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。
3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃
4 将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀。冷至50~55℃,倾注平皿。
注:此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热。以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。
44 DHL琼脂
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧胆酸钠 1g
硫代硫酸钠 2.3g
柠檬酸钠 1g
柠檬酸铁铵 1g
中性红 0.03g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
pH7.3
制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH。 再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50~55℃,倾注平板。
45 HE琼脂
成分:
脙胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨素 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
Andrade指示剂 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
制法:将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内,加热溶解。加入 甲液和乙液于基础液内,校正pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板。
注:①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制
硫代硫酸钠 34g
柠檬酸铁铵 4g
蒸馏水 100mL
②乙液的配制
去氧胆酸钠 10g
蒸馏水 100mL
②Andrade指示剂
酸性复红 0.5g
1mol/L氢氧化钠溶液 16mL
蒸馏水 100mL
将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。
46 SS琼脂
基础培养基:
牛肉膏 5g
眎胨 5g
三号胆盐 3.5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用。
完全培养基:
基础培养基 100mL
乳糖 10g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 8.5g
10%柠檬酸铁溶液 10mL
1%中性红溶液 2.5mL
0.1%煌绿溶液 0.33mL
加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用。
②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
③ 可以购用SS琼脂的干燥培养基。
47 WS琼脂
成分:
②胨 12g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸钠 2g
琼脂 15g
Andrade指示剂 20mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
甲液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正 pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色。
注:①供沙门氏菌分离用。
②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。
48 麦康凯琼脂
成分:
蛋白胨 17g
眎胨 3g
猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g
氯化钠 5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
乳糖 10g
0.01%结晶紫水溶液 10mL
0.5% 中性红水溶液 5mL
制法:
1 将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2。将琼脂加入600mL
加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。
2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
49 伊红美蓝琼脂(EMB)
成分:
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2%伊红Y溶液 20mL
0.65%美蓝溶液 10mL
蒸馏水 1000mL
pH7.1
制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至 50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
50三糖铁琼脂(TSI)
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2•6H2O〕 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法: 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
51 三糖铁琼脂(换用方法)
成分:
蛋白胨 15g
眎胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正 pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌 15min,放置高层斜面备用。
52 克氏双糖铁琼脂(KI)
上层培养基成分
血消化汤(pH7.6) 500mL
琼脂 6.5g
硫代硫酸钠 0.1g
硫酸亚铁铵 0.1g
乳糖 5g
0.2%酚红溶液 5mL
下层培养基成分
血消化汤(pH7.6) 500mL
琼脂 2g
葡萄糖 1g
0.2%酚红溶液 5mL
制法:
1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。
2 分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm×100mm试管内,每管约2mL。115℃高压灭菌10min。
3 将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。
4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,放成斜面。
53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
硫代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
54 葡萄糖半固体发酵管
成分:
蛋白胨 1g
牛肉膏 0.3g
氯化钠 0.5g
1。6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL
葡萄糖 1g
琼脂 0.3g
蒸馏水 100mL
pH7.4
制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌121℃ 15 min。
55 5%乳糖发酵管
成分:
蛋白胨 0.2g
氯化钠 0.5g
乳糖 5g
2% 溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL
蒸馏水 100mL
pH7.4
制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。
56 CAYE培养基
此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用Honda氏产毒肉汤。
57 Honda氏产毒肉汤
成分:
水解酪蛋白 20g
酵母浸膏粉 10g
氯化钠 2.5g
磷酸氢二钠 15g
葡萄糖 5g
微量元素 0.5mL
蒸馏水 1000mL
pH7.5
制法:溶解后校正pH,高压灭菌121℃ 15min,待冷至45~50℃时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含90μg。
微量元素配方:硫酸镁 5g,氯化铁 0.5g,氯化钻 2g,蒸馏水 100mL
58 Elek氏培养基(毒素测定用)
成分:
胨 20g
麦芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化钠 5g
琼脂 15g
40%氢氧化钠溶液 1.5mL
蒸馏水 1000mL
pH7.8
制法:用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合,分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
成分:
甲液:胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000mL
乙液:磷酸氢二钠 9.5g
蒸馏水 1000mL
丙液:氯化镁(MgCl2•6H2O) 40g
蒸馏水 400mL
以上分别在121℃灭菌15min。
丁液:孔雀绿 0.2g
蒸馏水 100mL
戊液:羧苄青霉素 1mg/mL
制法:取甲液620mL,乙液160mL,丙液212mL混合,再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL,即为 1000mL培养基。分装灭菌烧瓶,每瓶100mL,或灭菌试管10mL。
60 胰蛋白胨水
成分:
胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法:将上述成分溶解,校正pH。分装试管,121℃高压灭菌15min。
61 Rustigian氏尿素培养液
成分:
尿素 20.0g
酵母浸膏 0.1g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g
酚红 0.01g
蒸馏水 1000mL
制法:将上述成分:于蒸馏水中溶解,校正pH为6.8±0.2。 不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管 中,每管为约3mL。
用途:尿素酶试验用。
62 氯化钠结晶紫增菌液
成分:
蛋白胨 20g
氯化钠 40g
0.01%结晶紫溶液 5mL
蒸馏水 1000mL
pH9.0
制法:
除结晶紫外,其他按上述成分:配好,加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4。5mL,校正pH。加热煮沸,过滤。再加入结晶紫溶液,混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。
63 氯化钠蔗糖琼脂
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 10g
氯化钠 50g
蔗糖 10g
琼脂 18g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.8
制法:将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热溶解,过滤。加入指示剂,分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在 100mL培养基内加入蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板。
64 嗜盐菌选择性琼脂
成分:
蛋白胨 20g
氯化钠 40g
琼脂 17g
0.01% 结晶紫溶液 5mL
蒸馏水 1000mL
pH8.7
制法:除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正pH。加入琼脂,加热溶解。再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶100mL。
65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂
成分:
三糖铁琼脂 1000mL
氯化钠 30g
制法:按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装试管,121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
66 氯化钠血琼脂
成分:
酵母膏 3g
蛋白胨 10g
氯化钠 70g
磷酸氢二钠 5g
甘露醇 10g
结晶紫 0.001g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
制法:调pH8.0加热 30min(不必高压),待冷至45℃左右时,加入新鲜人或兔血(5%~10%)混合均匀,倾注平皿。
67 3.5%氯化钠生化试验培养基
成分及制法:根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为 3.5%,pH为7.7。
68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)
成分:
磷酸氢二钠(Na2HPO4 8.23g
磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O) 1.2g
氯化钠 (NaCl) 5.0g
三号胆盐 1.5g
山梨醇 20g
制法:将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加入三号胆盐及山梨醇,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于121℃高压灭菌15min,备用。
69 CIN-1培养基
基础培养基
胰胨 20.0g
酵母浸膏 2.0g
甘露醇 20.0g
氯化钠 1.0g
去氧胆酸钠 2.0g
硫酸镁(MgSO4•7H2O) 0.01g
琼脂 12.0g
蒸馏水 950mL
pH7.5±0.1
将基础培养基高压灭菌。
Irgasan
以 95%的乙醇作溶剂,溶解二苯醚,配成0。4%的溶液,待基础液冷至80℃时,加入1mL混匀。
冷至50℃时,加入:
中性红 (3mg/mL) 10.0mL
结晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL
头孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL
新生霉素 (0.25mg/mL) 10.0mL
最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶,倒平皿。
70 嗜盐性试验培养基
成分:
蛋白胨 2g
氯化钠 按不同量加
蒸馏水 100mL
pH7.7
制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加; (2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min。