1.孕18天（E18d）SD大鼠。
2.培养板处理，每孔加0.01％多聚赖氨酸（PDL）盖没底部，过夜移去。
3.无菌水洗2次后，加DMEM＋10％BS培养液平衡。
4.SD大鼠戊巴比妥麻醉，先用碘酒消毒大鼠腹部，再用75％乙醇消毒，切开子宫取胎鼠，移入超净台中，去除胎盘和脐带，将胎鼠放入另一无菌平皿中。
5.直接取脑。直头镊子将头部膜去除，如果不易去除，用尖头镊子刺一下；用弯头镊子将脑取出。
6.剥脑（取纹状体组织，去除脑膜血管），解剖显微镜下除去小脑，将大脑左右半球沿中缝分开，镊子去除中脑部分，然后将脑膜去除（去除脑膜主要是除去上皮细胞）。将去除脑膜后的半脑尽量分开，确认嗅球的位置，轻轻将皮层展开。嗅球后面颜色深的部分即为纹状体，海马为半透明月牙状。将组织放入4度的D－Hanks溶液中。
7.移去D－Hanks溶液，用虹膜剪将组织剪成1×1×1mm3的小块。
8.取0.125％胰酶（溶解在D－Hanks）5mL，加入20μL 25mg/mL Dnase，放入10mL离心管中，将剪碎的组织放入胰酶，37度消化15min，消化过程中轻摇2～3次。
9.将消化后的组织移入另一离心管，用DMEM＋10％BS 终止反应。DMEM＋10％BS加至6mL。
10.用火焰刨光的玻璃滴管轻轻吹打数次，静止2-3min，吸出上层细胞悬液至50mL离心管中，剩下的另加入DMEM＋10％BS至6mL，用滴管轻吹数次，移入至50mL离心管中。
11.细胞计数。用DMEM＋10％BS培养液调整细胞密度，接种在35mm皿中。（计数时，稀释5倍计数）。细胞数目7～8×105个 /mL，6孔板加入1mL。
12.5小时后换成全部Neurobasal＋B27 2％，以后每隔2～3天进行1/3-1/2量换液。
神经元细胞沉降速度快，计数和种板前要混匀，种板时边摇烧杯，边加，使细胞悬浮。
