细胞质内含有多种细胞器。有些细胞器如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体等普遍存在于各种细胞中，而另有些细胞器如叶绿体，只存在于植物细胞中。细胞质内的这些结构，除叶绿体外，一般在光学显微镜下不易看见，必须经过一定的固定染色方法处理后，才能看到大多数细胞器，或直接用相差显微镜观察。
线粒体
线粒体是一种动态的易变结构。经过处理在光学显微镜下呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体的形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发生变化，例如肝细胞、胰细胞的线粒体通常呈线状，成熟的卵细胞内线粒体呈颗粒状，肾细胞内的线粒体呈棒状。显示线粒体的方法可以概括为以下几种：
1．生活细胞的观察。如将组织培养细胞或其他生活细胞，放在相差显微镜下，就可以看到细胞质内有线状小体活动，这就是线粒体。
2．活细胞染色法。就是利用某些无毒或毒性较小的染料，显示出细胞内某些特殊结构存在的真实性，而并不对细胞的活动有影响，如Janus green B（詹纳斯绿B），就是一种毒性较小的碱性染料。将其配制成一定浓度，对活细胞进行染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体，这就是线粒体。还可看到其在细胞质内的活动状况。线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
3．固定染色法（即永久制片法）。用特殊的固定液染色处理动物的组织或细胞后，可显示出线粒体的形态。但所用材料必须新鲜，否则线粒体常因已经破坏而显示不出，线粒体的组成成分主要是脂蛋白，脂类又以磷脂为主，用于线粒体的固定液含有饿酸，重铬酸钾等。因为两者均能使脂类物质保存下来，故可显示出线粒体的形态。用于显示线粒体形态的固定、染色方法较多，常用的有Altmann染色法、Regand染色法及Chmpy-Kull染色法等，但欲显示线粒体的细微结构，则要用电镜技术。
4．生化分离提取方法。在一定的低温条件下，将组织细胞破碎制备成匀浆，用于线粒体组分及其在不同生理状态的分离分析研究。
高尔基体
高尔基体显示的方法，目前使用较多的是：
1．固定染色法。1889年Golgi用镀银的方法显示出这种细胞器，目前仍应用AgNO3或饿酸处理材料，将高尔基体显示为棕黑色。这是由于AgNO3、饿酸在高尔基体的部位被还原之故，所以显出高尔基体的形态及其在细胞内的分布。常用的方法有DaFano硝酸钴-硝酸银镀银法，Aoyama镀银法及Romony Cajal镀银法等，而欲显示其细胞结构，就得使用电镜技术。
2．活体染色法。将中性红配制成一定的浓度，对细胞进行活体染色，以显示高尔基体。但此种显示高尔基体的方法，仍不如詹纳斯绿显示线粒体的方法更为广泛。因为中性红只能染高尔基体的液泡部分，因此有一定的局限性。
一、目的与要求
本次实验的重点是观察线粒体及高尔基体形态及其在细胞内的分布，主要观察永久制片，同时也做一些活体染色的观察。此外，还要与电镜照片比较，以进一步了解认识这两种细胞器的超微结构。其次，还应知道细胞质内除上述两种细胞器之外，还有其他的细胞器如叶绿体、中心体等，细胞质内除细胞器外，还有内含物如脂类，多糖等。
二、实验内容
1．线粒体的观察
2．高尔基体的观察
3．叶绿体的观察
4．细胞内含物（多糖、脂滴、淀粉粒）的观察
三、实验步骤
（一）线粒体
1．永久制片的观察
本次实验所用标本是按Regand染色法制作的。简单的讲，这种方法，所选用的固定剂是重铬酸钾和福尔马林，材料经过固定、脱水、透明、包埋于石蜡中；在经切片制成薄切片标本；然后，用铁矾苏本精进行染色，细胞质内的线粒体被染成蓝黑色（详细制作方法见本实验末附录）。
观察制版标本时，要注意线粒体在不同细胞内的心态及在细胞质内的分布部位。
（1）兔肝细胞：先在低倍镜下找到标本，再换高倍镜观察，肝细胞为多角形的较大细胞，细胞中央有一圆形细胞核，此时换上油镜头，再继续观察，注意在肝细胞只能感线粒体是什么形状？它们在细胞质内是怎样分布的？
按上述方法继续观察其他标本。
（2）小鼠肾细胞：肾小管细胞为方形，在细胞核周围被染成蓝黑色的是线粒体，仔细观察它们是什么形状？
（3）小鼠肠细胞：细胞呈长柱状，注意线粒体形状及在细胞内的分布？
2．活体染色标本的制作与观察
（1）活体染色所用染色剂的一般要求
染料浓度：一般是非常稀的，詹纳斯绿作为活体染液，它的使用浓度范围在1/3000—1/10000，也有人用1/30000浓度。使用浓度要依不同材料而异，如对植物细胞线粒体的活体染色，可用1%，配制时可用等渗盐水，如生理盐水或Ringer液。
配制时间：宜在使用时配制新鲜液，不可久存。
（2）鼠肝细胞线粒体的活体染色：剪断颈动脉，放血处死小鼠，剖腹，取出肝脏，放在滴定板上。沿肝脏边缘，用刀片切取2—3mm厚的切片，置滴定板的凹孔内。加2—3滴1/10000浓度的詹纳斯绿染液，染色20—30分钟。取出肚脏，用生理盐水洗去染料，再用刀片切取很薄的小片，置载片上。滴一滴生理盐水于肝切片上，加上盖玻片，再放上一张小滤纸，用拇指猛压载片，使细胞分离或压碎。
观察时，先在低倍镜下找到完整的肝细胞，再在高倍镜下观察细胞质内的线粒体。
（3）洋葱鳞片表皮细胞线粒体的活体染色：取一载玻片，在其中央加一滴0.5%詹纳斯绿染液。用镊子从洋葱鳞片的内表面撕下一小块表皮，放在载玻片上的染料中，并使其展开，染5—10分钟，用吸管吸取蒸馏水，滴于染色的载玻片上，使染液冲淡，最后使标本周围液体近于无色。此时，用镊子取一盖玻片，先将它的一边轻轻接触到载玻片染液的边缘。此时再慢慢地放下盖玻片，这样可以避免出现气泡。如载玻片上水过多，可用一吸水纸从盖玻片的一侧吸去过多的染液。此时，可放在显微镜下进行观察。
先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注意细胞核位于细胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。
3．电镜照片的观察
观察了光学显微镜的线粒体以后，在观察线粒体的电镜照片。在电镜照片上，可以看到，线粒体不是一个简单的杆状或颗粒状，从切面看它是一个具有双层膜的小囊：外膜完整、内膜连续不断地向线粒体的基质褶入，形成一些列双膜的嵴（cristae）. 嵴的形状和数目随细胞不同而异。可以说线粒体是一个复杂的膜系统。
（二）高尔基体
本实验所用标本是按Aoyama镀银法制作的，简单地讲。在制作中，首先将材料放于含有氯化（）和福尔马林的固定剂中，进行固定，然后镀银，若干小时后，取出放入还原液。最后，经脱水、包埋、切片，制成薄切标本。用这种方法制成的标本，在细胞内的高尔基体被显示为棕黑色（详细方法见本实验末附录）。
1．高尔基体永久制片的观察。在兔神经节细胞核的周围原生质中，可看到棕黑色的网状物，此即为高尔基体。
2．高尔基体电镜照片的观察
在观察了光学显微镜下的高尔基体后，在观察示范电镜照片，注意高尔基体是由几部分组成的。
（三）叶绿体
叶绿体—示范：叶片横切面上，在叶肉细胞质部位有许多圆形颗粒，此即叶绿体。
此种材料，亦可取新鲜叶片，用刀片做徒手切片或用镊子撕下菠菜叶肉细胞将切片放于载玻片上，滴一滴蒸馏水，加上盖玻片，即可在显微镜下直接观察绿色的叶绿体。
在电镜下，叶绿体和线粒体一样，也显示为一个复杂的膜系统，对照电镜照片你能说出叶绿体的超微结构吗？
（四）细胞内含物
1．多糖：观察小鼠肝细胞的永久制片，肝细胞内储存有大量的肝糖，可以用PAS反应显示肝糖在细胞内存在的部位。
2．脂滴：取花生的子叶，用徒手切片法，切成薄片，放于载玻片上，加一滴苏丹3染液染色5分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖玻片，即可进行观察，观察时注意脂滴的颜色及其在细胞内的分布。
3．淀粉：取一块马铃薯，用徒手切片法，切成薄片，将薄片放于载玻片上的水滴中，加盖玻片后即可观察，先观察一下淀粉粒的形状及在细胞内的分布，然后在加碘液染色5分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖片观察。
附录：线粒体及高尔基体永久标本的制作
（一）显示线粒体—Regand染色法
1．取材固定：固定材料必须新鲜，所以要求杀死动物后立即取材，切成1—2mm3大小的块，投入固定液中。
固定液：
3%重铬酸钾20ml
福尔马林（中性）5ml
固定4天（可在冰箱中），每天换固定液一次。4天后转入3%重铬酸钾中7天，每2天换一次液体。
2．流水冲洗24小时后，脱水、透明、包埋、切片等过程均按常规。
3．染色
（1）切片脱蜡到水（按常规）；
（2）媒染：用5%铁明矾溶液，在35℃内放24小时后用蒸馏水洗；
（3）染色：苏木精液染24小时；
（4）分色：用5%铁明矾进行分色，此步要在显微镜下进行，边分色，边检查，直至适合为止；
（5）水洗；
（6）脱水——封片（按常规）；
（7）镜检：线粒体被染成蓝黑色。
（二）显示高尔基体—DaFano氏硝酸钴镀银法
1．溶液的配制
（1）硝酸钴溶液：
硝酸钴1g
中性福尔马林15ml
蒸馏水35ml
（或用乙醇或甲醇30ml，中性福尔马林15—20ml，水80ml配制）
（2）硝酸银溶液：
硝酸银1.5g
蒸馏水 100m
（3）还原剂：
对苯二酚1—2g
中性福尔马林15ml
亚硫酸钠0.1—0.5g
蒸馏水100ml
2．镀银步骤
（1）固定：在硝酸钴溶液中固定10—24小时，但不宜超过24小时；
（2）蒸馏水快洗；
（3）室温下在硝酸银溶液中放置36—48小时；
（4）蒸馏水冲洗；
（5）还原剂中还原，8—24小时；
（6）蒸馏水洗，快步脱水，透明，包埋；
（7）切片—帖片—脱蜡到水—封片；
（8）镜检，高尔基体呈黑色，细胞质呈黄色。
