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  • 基因组DNA Southern杂交操作步骤

    1)基因组DNA Southern印迹的制备 预备 1.用适当的限制性内切酶消化基因组DNA样品(10μg)。 2.进行琼脂凝胶电泳。一般用0.7~1.0%的琼脂凝胶分离基因组DNA,它在1~15kb的范围内有较好的分辨率,可选用TBE或TAE缓冲液。琼脂凝胶电泳需在
    2010/03/08
  • Southern印迹技术原理和操作步骤

    实验原理: Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物(如硝酸纤维素膜、尼龙膜)上,使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段,进行琼脂凝胶电泳,各片段因分子量不同而彼此分开,然后经碱处理凝胶,使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作
    2010/03/07
  • Southern blot杂交鉴定(cross identification)

    1)取10ul待测DNA,于一定浓度的琼脂凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,) 2) 凝胶用溴化乙锭染色,切掉凝胶四周多余部分,并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。 3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一) A.将凝胶浸没入
    2010/03/07
  • 植物DNA的提取(CTAB法)

    实验内容 采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA,并进行纯度分析和琼脂凝胶电泳。 目的要求 掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。 实验原理 1、原理 核酸是生物有机体中的重要成分,在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。核酸分为脱氧核
    2010/03/07
  • 琼脂凝胶电泳检测DNA实验原理和操作方法

    实验原理 琼脂凝胶电泳是分离、纯化、鉴定DNA片断的典型方法,其特点为简便、快速。DNA片断琼脂凝胶电泳的原理与蛋白质的电泳原理基本相同,DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过介质而泳动,除电荷效应外,凝胶介质还有分子筛效应
    2010/03/07
  • 凝胶电泳(gel electrophoresis)常见问题分析

    琼脂凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的? 参考见解: DNA带模糊: 1、 DNA降解??避免核酸酶污染。 2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。 3、 所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DN
    2010/03/04
  • DNA的琼脂凝胶电泳实验原理、仪器试剂和操作步骤

    一、原理 DNA在碱性的溶液中带有负电荷,因此,在电场作用下朝正极移动。在琼脂凝胶电泳时,由于琼脂凝胶具有一定孔径,长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一,迁移的速度不同,从而可以按照分子量大小得到有效分离。溴化乙锭可插入到DNA分子的双链中。在紫外光的照射下
    2010/03/04
  • 琼脂凝胶电泳回收PCR产物

    一.原理 DNA片断的分离与回收是基因工程操作中的一项重要技术,例如可收集特定酶切片断用于克隆或制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是纯度和回收率:前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应;后者不理想时往往会大大增加前期的...
    2010/03/04
  • 琼脂凝胶电泳及其影响因素

    琼脂或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而
    2010/03/04
  • 琼脂凝胶电泳实验

    【实验目的】 学习水平式琼脂凝胶电泳检测DNA 的方法和技术。 【实验原理】 琼脂凝胶电泳技术是DNA 分子片段的分子量测定和分子构象研究以及DNA 分离纯化的重要实验手段。DNA 分子在琼脂凝胶电泳中泳动时受到电场驱动力和凝胶的摩擦阻力。一般情况下,单位长度双链DN
    2010/03/04