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  • 核酸电泳(RNA电泳与DNA电泳

    (一)DNA的凝胶电泳凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。 1.琼脂凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高。 2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的D
    2010/03/03
  • PCR扩增产物的电泳分析

    凝胶电泳琼脂电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。 一、琼脂凝胶电泳 琼脂凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂的溶解温度,把琼脂分为一般琼脂和低熔点琼脂。低熔点琼脂熔点为62~65℃,溶解...
    2010/03/03
  • 琼脂凝胶电泳加样的注意事项

    DNA分子带负电,从琼脂凝胶的负极向正极泳动,速度依赖于其分子质量。小的紧密的DNA分子的较大伸展片断容易穿过琼脂介质。依据所要分离的 DNA分子的大小来选择琼脂的浓度,例如质量浓度3mg/ml的琼脂用来做DNA大片段电泳(>20 000碱基)而0.8%只能电泳小的片断。
    2010/03/03
  • 核酸电泳指示剂和染色剂的选择

    指示剂: 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色,在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色,它在 1%和1.4%琼
    2010/03/03
  • 琼脂凝胶电泳迁移速率的影响因素

    1、DNA的分子大小及构型 不同构型DNA的移动速度次序为:供价闭环DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大
    2010/03/03
  • 琼脂凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)介绍

    主要试剂: 核酸电泳缓冲液有三种,即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE与TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DNA段回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀.TAE缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用TBE.缓冲液中的
    2010/03/03
  • DNA片段的回收与纯化

    一、实验目的 学习与掌握从琼脂电泳中回收DNA片段的方法 二、实验原理 对于混合的DNA样品(例如限制性酶切产物等)进行检测和纯化的一种常用方法是进行琼脂电泳分析,从电泳后的凝胶中回收出某一DNA带,经过有机溶剂的抽提等一系列纯化过程,便可得到纯化的DNA片段,回收的方
    2010/02/28
  • DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳(GFGE)

    DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定(FADU)法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法:
    2010/02/05
  • 基因操作的主要技术原理 课件

    核酸的凝胶电泳 •扩增原理 •分子杂交 •测序 核酸的凝胶电泳 它是一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段,同时也是分子生物学研究方法的技术基础。 基本原理 带有负电荷的DNA或RNA核苷酸链,依靠无反应活性的稳定的介质(琼脂凝胶和聚丙烯酰
    2010/02/03
  • 质粒DNA的提取与质粒DNA琼脂凝胶电泳鉴定

    一、大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法。 碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下: 1、接1%含质粒的大肠杆菌
    2010/01/26