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  • Inoue法制备大肠杆菌超级感受细胞

    实验步骤: 1、Inoculate from an overnight grown in LB.从培养过夜的LB平板上挑取单菌落 。 2、Grow in 250 ml "SOB" at 18℃ until OD600 = 0.6.(0.3)接种于250ml SOB,18度培养
    2010/02/10
  • 大肠杆菌DH5a感受细胞转化率的改进

    刘静华,包英华,陈燕飞 (韶关学院英东生物工程学院,广东韶关512oo5) 摘要:针对实验材料E.coli DH5a,对该茵株在不同生长时期的转化效率进行测定,确立了一个能制备高转化率感受细胞的实验方案.结果表明:在细茵的生长繁殖过程中,其转化率有很大变化;得到了E.coi
    2010/01/25
  • 用氯化钙制备和转化感受大肠杆菌

    下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改。这一方法可以用于批量制备感受细胞,其转化效率可达到5×106-2×107个转化克隆/ug超螺旋质粒DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制备的感受细胞可以在-70℃冻存。但随着冻存期的
    2010/01/25
  • 耐药质粒DNA转化实验

      本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆,即转化子。      【原理】   受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理,可改变细胞膜的通透性,利于受体菌对DNA的摄取,这种经Ca++ 处理的细菌称感受菌。pBR322
    2010/01/25
  • 大肠杆菌电转化感受细胞制备实验步骤和转化方法

    实验步骤: 1、将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37℃下过夜培养 。 2、高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)。准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备重悬浮细胞用 。 3、转移0.2-1ml过夜培养物至装有5
    2010/01/22
  • 用氯化钙制备新鲜的大肠杆菌感受细胞

    下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株,并且比方案I快速,重复性更好。该
    2010/01/19
  • 大肠杆菌感受细胞的制备和转化

    第一节 概述   在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受以摄取外源DNA。  
    2010/01/19
  • CaCl2法制备大肠杆菌感受细胞的原理和实验步骤

    原理: 转化(Transformation ):将外源DNA 分子引入受体细菌,使之获得新的遗传性状。 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株,不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-,M-),可以容忍外源DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法,如电
    2010/01/14
  • 受体菌感受细胞的制备原理、方法与步骤

    一、目的与原理 当细菌处于容易吸收外源DNA的状时,即为感受,而用理化手段使细菌处于感受的操作为致敏过程。感受细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受细胞。 二、材料和方法 1. 材料:大肠杆菌 2. 仪器: 离
    2010/01/14
  • 感受细胞的制备实验原理及过程

    ...获得大量质粒。 本次实验的目的就是增加质粒的数量。 同时,我们能掌握大肠杆菌感受细胞的制备及转化的
    2010/01/14