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  • 大肠杆菌感受细胞的制备及转化

    一、实验原理 体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。研究发现,用含Ca2+ 的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状称为感受。用理化方法可以诱导细胞进入感受,如
    2010/04/05
  • 直接导入法将中间载体质粒导入根癌农杆菌

    一、原理 同大肠杆菌一样,根癌农杆菌细胞在对数生长的早中期,经一定浓度的CaCl2处理后也可进入感受。通过低温处理和37℃热击可使中间载体质粒DNA容易进入到根癌农杆菌细胞中,并在其中复制与表达。已摄入外源质粒DNA的细胞可在含有适当抗生素的培养基上生长,而不含质粒细菌则不能
    2010/03/29
  • 质粒的转化及转化子的鉴定

    ...用多种方法筛选和鉴定目的克隆。 实验目的: 掌握热激法或电转化法转化大肠杆菌感受细胞及转化子的鉴定方法。 实验材料: 外源片段与载体的连接产
    2010/03/20
  • 大肠杆菌感受细胞的制备及转化实验原理和步骤

    [实验原理] (供参考,试剂盒的Solution SS成分未知) 细菌处于容易吸收外源DNA的状感受。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是:在0℃下的CaCl2低渗溶液中,细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA形成不易被DNA酶所降解的羟
    2010/03/06
  • 制备高效率感受细胞的注意要点

    关于大肠杆菌感受制备及转化的方法很多,最复杂的莫过于电转化,而最简单的则是将LB平板上的菌落直接挑入装有缓冲液的EP管冰箱即开始转化。对于做克隆工作的人而言,高而稳定的感受可减轻不少麻烦。 现在大肠杆菌转化效率最高的要数电转化,可达到1010,但是操作起来比较麻烦。要想又
    2010/02/26
  • 大肠杆菌感受细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选

    1. 实验目的和要求 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2. 相关知识及原理 感受细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法(如
    2010/02/26
  • 大肠杆菌感受细胞的几种制备方法protocol

    细胞不能摄入外部溶液中的DNA,所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl,RuCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受细胞(competent cell
    2010/02/26
  • 重组质粒的转化、筛选和鉴定操作

    一、实验目的: 1、学习克隆工作中最常用的双酶切; 2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术; 3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受细胞的技术; 4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 5、外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。 6、学
    2010/02/26
  • 大肠杆菌感受细胞的制备和转化原理和操作步骤

    1.概 述 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受以摄取外源DNA。 转化(
    2010/02/24
  • 大肠杆菌电转化感受细胞制备和转化方法

    大肠杆菌电转化感受细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二
    2010/02/24