大肠杆菌感受态细胞-搜索-生物探索

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大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化

大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化

2017/01/17
大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点

最近做克隆测序，非常不顺利，很苦恼。简单描述一下：目的片段1.5kb，使用的是TAKARA pMD19-T载体，载体和PCR产物比例为1:4左右，4度连接过夜，转化DH5a感受态细胞，以control片段做对照，42度热击，复壮后涂amp板子，培养14小时候，平板上有菌落长出来（解释一下：为了省事，没有加x-gal和IPTG），但是在...

2013/03/28
耐药质粒DNA的转化

实验概要本实验介绍了将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。实验原理受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四环素（Tc）基因，如将pBR322...

2013/03/07
氯化钙法（Calcium Chloride）大肠杆菌感受态细胞的制备

2012/03/28
基因克隆实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

2011/10/20
基因克隆实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

2011/10/20
基因克隆实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

2011/10/20
细菌培养及CaCl2法制备感受态细胞

实验目的：明确培养基的配制原理；通过对LB培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤；掌握细菌的接种、培养的无菌操作方法和步骤。实验原理：重组DNA分子（质粒、噬菌体、粘性质粒）必须导入宿主菌中，通过细菌培养来扩增所需的重组DNA。 大肠杆菌与其它微生物一样，都具

2010/04/29
大肠杆菌感受态细胞的制备

实验原理感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的载体分子进入的感受态细胞。目前常用的感受态细胞制备方法有

2010/04/22
感受态菌的制备原理、仪器试剂和操作步骤

1．目的学会CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞。 2．原理细菌在0℃ CaCl2低渗溶液中胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA的状态。 3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，50ml 微量离心管，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式

2010/04/06

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