10× genomics单细胞测序样品准备指南
生物探索 · 2018/09/20
01客户预约与上门建库欧易生物向客户提供10× genomics 上门建库服务,提前两周进行预约即可,老师需尽量自备以下仪器和耗材:02样品要求和样品准备原则1. 样品要求(1)样品总量:细胞悬浮液,一个样品细胞起始量大于1×105个;(2

01

客户预约与上门建库

欧易生物向客户提供10× genomics 上门建库服务,提前两周进行预约即可,老师需尽量自备以下仪器和耗材:


02

样品要求和样品准备原则

1. 样品要求

(1)样品总量:细胞悬浮液,一个样品细胞起始量大于1×10 5个;

(2)样品浓度:5×10 5 - 1.2×10 6/ mL,最低需要1×10 5/ mL;

(3)细胞活性:细胞活率在90 % 以上;

(4)细胞大小:直径小于40 μm;

(5)细胞培养基及缓冲液不能含有Ca 2+和Mg 2+等影响酶活性的物质;

(6)组织需解离成单细胞悬液,植物细胞需制成原生质体。

2. 样品准备原则

(1)建议使用宽口枪头重悬,以减少对细胞的损伤;

(2)每次移液前先混匀细胞悬液,然后从管中部吸取;

(3)所有环节最好在无菌环节下操作、使用无核酸酶的试剂、减少移液步骤;

(4)取样时最好设置两个重复,对每个样品计数2次;

(5)弃上清时注意不要破坏细胞沉淀;

(6)某些细胞如 hPBMCs 在PBS中易成团状,从而降低细胞的有效浓度,因此制备细胞悬液要迅速,最好在30分钟内完成;

(7)最佳上样体积为2.5 μL-15 μL,建议上样前根据需要上样的细胞数调整单细胞悬液浓度;

(8)对于直径较大的细胞如永生化细胞株建议室温下150 rcf 离心3 min,对于直径较小的细胞如 PBMCs 建议室温下300 rcf 离心5 min;

(9)重悬细胞浓度建议不要超过5000 cells/ μL,最理想的范围保持在700-1200 cells/ μL,此浓度下计数较为准确;

(10)一般选用含0.04 % BSA(400 μg/ mL)的1× PBS溶液重悬细胞。


03

样品制备方法

目前 10× genomics 样品的制备没有一个金标准,即很难找到一个可以适用于所有样品的制备方法。根据官方推荐和文献参考,结合公司在样品制备方面的技术经验,我们总结出以下不同类型样品制备单细胞悬液的方法:

(1)组织样品需要通过酶促解离的方法制成单细胞悬液,我们提供了多种类型组织的解离方案;

(2)细胞数量较少(小于100,000)的样品可适当减少洗涤次数;

(3)细胞直径过大的样品,可以分离细胞核,制备细胞核悬液;

(4)植物细胞须要去除细胞壁得到原生质体的悬液,我们提供了苔藓样品的制备方案供老师参考。

详细的样品制备方法和步骤详见上海欧易生物推出的《10× genomics 单细胞测序样品准备指南》(目录如下图所示),若有需要的老师可向当地负责人联系。


END

本文系欧易生物原创

转载请注明本文转自欧易生物

查看更多
发表评论 我在frontend\modules\comment\widgets\views\文件夹下面 test