槐甙对大鼠骨细胞的作用研究
生物探索 · 2018/08/29
槐甙属于天然黄酮类物质,细胞药效学研究表明槐甙与其代谢物染料木素均能显著抑制体外培养破骨细胞的分化成熟的骨吸收能力,具有破骨细胞骨吸收抑制功能。因此结合动物试验结果可以确定槐甙可以口服吸收入血分布到骨组织,具有对成骨细胞骨形成促进与破骨细胞

槐甙属于天然黄酮类物质,细胞药效学研究表明槐甙与其代谢物染料木素均能显著抑制体外培养破骨细胞的分化成熟的骨吸收能力,具有破骨细胞骨吸收抑制功能。因此结合动物试验结果可以确定槐甙可以口服吸收入血分布到骨组织,具有对成骨细胞骨形成促进与破骨细胞骨吸收抑制双重作用。该研究结果支持槐甙成为一种用于预防和治疗老年妇女的骨质疏松症的药物。

药效学的深入研究包括细胞水平和分子水平的分析研究。细胞药效学研究是在细胞水平研究药物作用并分析作用机理的实验方法,该方法不仅可以确定药物的治疗作用,还能确定药物的一般药理作用,为新药临床试验提供可靠依据,美迪西提供细胞药效学研究服务。

1、大鼠体外骨细胞药效学研究

采用新生大鼠头盖骨酶消化法分离培养成骨细胞,取2-3继代细胞给予10^(-12)M、10^(-10)M、10^(-8)M、10^(-6)M、10^(-4)M浓度槐甙,72小时后用MTT法与对硝基苯磷酸盐法(PNPP)法检测细胞增殖与ALP活性。MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。应用新生1-3天龄大鼠四肢长骨机械法分离破骨细胞,给予10^(-8)M、10^(-6)M浓度槐甙,72小时后用染色计数TRAP阳性破骨细胞数,染色计量骨吸收陷窝面积,同时设0(助溶剂)与阳性药物(染料木素与雌二醇)对照。

槐甙与0对照比较显示,10^(-12)、10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)、10^(-4)mol/L浓度槐甙显著提高MTT与ALP检测的OD值(P<0.05-0.01)。染料木素仅10^(-8)组的增殖刺激作用具有统计学意义(P<0.05);雌二醇10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)浓度组的增殖刺激作用均显示统计学意义(P<0.01)。

对OB分化的影响,与空白组比较,10^(-12)、10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)、10^(-4)mol/L浓度槐甙对OB均具有分化刺激作用(P<0.05-0.01);染料木素仅在10^(-8)、10^(-6)mol/L浓度组显示显著分化刺激作用(P<0.01);雌二醇10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)浓度组的分化刺激作用均显示统计学意义(P<0.01)。

中、高浓度槐甙、染料木素和雌二醇对体外培养TRAP阳性破骨细胞数均具有显著抑制作用(P<0.01-0.001);与对照组比较,抑制率达20.3%-36.1%,其中10^(-6)浓度组雌二醇的抑制率为36.1%;10^(-8)槐甙组为34.8%。槐甙、染料木素和雌二醇各浓度组对体外培养破骨细胞骨吸收均具有抑制作用,除雌二醇中浓度组,其余均具有统计学意义(P<0.05-0.01);骨片吸收陷窝面积抑制率达22.68%-46.78%。

因此得出结论槐甙能直接吸收入血分布到相关组织和靶细胞中,其代谢物大部分转变成染料木素,骨是槐甙和染料木素的共同靶器官之一。槐甙低、中、高浓度均显著提高成骨细胞的增殖与分化刺激作用,具有骨形成促进作用;染料木素仅在中等浓度组才显著增殖与分化刺激成骨细胞。因此槐甙与染料木素均能显著抑制体外培养破骨细胞的分化成熟的骨吸收能力,具有破骨细胞骨吸收抑制功能。

2、槐甙对于去卵巢大鼠骨量丢失具有预防作用

大鼠去卵巢建立绝经后骨质疏松症动物模型观察槐甙对雌激素缺乏引起的骨量丢失的预防作用。

将5 0只SD雌性大鼠随机分为假手术 (SHAM )组、去卵巢 (OVX)组、槐甙低剂量组 ( 4mg.kg-1.d-1)、槐甙中剂量组 ( 8mg.kg-1.d-1)、槐甙高剂量组 ( 16mg.kg-1.d-1),造模 3d后进行药物干预,服药 1个月后处死,对胫骨近端及腰椎进行形态计量学分析。

结果发现OVX组大鼠与SHAM组比较,胫骨近端和腰椎骨量分别丢失了32.97%和 2 9.31%;骨小梁宽度变窄,节点数明显减少 (P <0.0 5 );骨小梁间距增大 (P <0.0 5 )。槐甙中、高剂量组对去卵巢引起的骨量丢失有较好的预防作用,与OVX组比较,胫骨骨小梁骨量分别上升 15.2 8%和 2 2.81% ,第三腰椎骨小梁骨量分别上升 14.2 3%和 2 1.2 %;两组骨小梁宽度变宽,节点数明显增加 (P <0.0 5 );骨小梁间距减小 (P <0.0 5 )。低剂量则无明显治疗效果。

因此得出结论,中高剂量槐甙可以有效恢复骨组织的形态,提高骨量,在骨质疏松症的治疗中发挥作用。

 


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