MTT/噻唑蓝 细胞增殖 细胞活性 药物筛选
MTT商品名噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。MTT主要用途: 1.药物(或其他处理方式)对体外培养的细胞活性的测定; 2.细胞增殖及细胞活性测定。 MTT广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的药物筛选、细胞活性试验以及肿瘤敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济实惠。

货号:CT-MTT-1

包装量:1.0克MTT粉末

价格:288元

储存:+4°C,避光

 

MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。在水中的溶解度为20 mM。

 

技术资料:

CAS No:298-93-1

分子量:414.32

分子式:C18H16N5SBr

纯度:>98%

 

MTT主要有两个用途:

1.药物(或其他处理方式)对体外培养的细胞活性的测定;

2.细胞增殖及细胞活性测定。

 

MTT实验的原理:

细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢(Formazan),并沉积在细胞中,而死细胞不能进行这个反应。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臢,用酶标仪在570 nm波长处(490 nm-570 nm之间都可以)测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的药物筛选、细胞活性试验以及肿瘤敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济实惠。

 

MTT实验方法(供参考)

 

一、MTT的配制

通常配制的MTT浓度为5 mg/ml。可以称取MTT0.5克,溶于100ml的磷酸盐缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃避光保存,两周内用完。也可分装后避光保存在-20℃长期保存,并避免反复冻融。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。

 

二、实验步骤

A、贴壁细胞

1、收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,向96孔板每孔加入100ul铺板,调节待测细胞密度使每孔含1000-10000个细胞,边缘孔用无菌水或PBS填充。

2、在5%CO2,37℃条件下孵育。原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,或过夜。一般常在前一天下午铺板,次日上午加药。一般设5-7个药物梯度,每孔100ul,一般设3个复孔即可,复孔越多结果越准确。同时设置调零孔(仅含培养基和药物溶解介质)和对照孔(仅含细胞和药物溶解介质)。

3、置于5%CO2,37℃条件下,孵育时间根据药物的作用特点来决定,一般24-72小时,中途可在倒置显微镜下观察细胞状况。

4、每孔加入20ul MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),37℃继续培养3-4小时。若药物能够与MTT反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS洗2-3遍后,再加入含MTT的培养液。

5、终止培养,小心吸去孔内培养液。

6、每孔加入150 ul DMSO,置摇床上低速振荡10分钟,使结晶物充分溶解。在570nm(可用630nm校准)测量各孔的吸光值。

 

B、悬浮细胞

1、收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1E6/ml,依次将①细胞悬液50ul(即5E4cell/孔),②待检测药物50ul,共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水或PBS填充)。一般设5-7个药物梯度,一般设3个复孔即可,复孔越多结果越准确。同时设置调零孔(仅含培养基和药物溶解介质)和对照孔(仅含细胞和药物溶解介质)。

2、置于5% CO2,37 ℃条件下,孵育时间根据药物的作用特点来决定,一般24-72小时,中途可在倒置显微镜下观察细胞状况。

3、每孔加入10 ul MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),37℃继续培养3-4 h。

4、离心(1000转x10 min),小心吸掉上清,每孔加入150μlDMSO,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在570nm(可用630 nm校准)测量各孔的吸光值。

 

注意事项

1、MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为保证实验结果的准确,MTT 吸光值要控制在仪器的线性读取范围内。

2、MTT最好现用现配,配制成5mg/ml无菌过滤后,在4 ℃避光保存两周内有效,或在-20℃长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光,以免分解。

3、保存的MTT溶液需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,不放心的话可以把操作台上的照明灯关掉。

4、配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配,可用60℃水浴助溶。

5、MTT的缺点:由于MTT经还原所产生的甲臢产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲臢的有机溶剂对实验者也有损害。

6、MTT有致癌性,用的时候小心,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作,最好戴透明的薄膜PE手套。

7、本产品仅限于专业人员的科学研究使用。

 


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