微粒体(microsome)的分离
易生物实验 · 2010/02/21
细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离

细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离微粒体的方法是利用分级离心方法,去掉细胞核、线粒体后,经超速离心法而制备。具体步骤如下。

1. 将体重约为300g饥俄20h后的大鼠断头,取出肝脏,洗涤,剪碎,加2倍体积的介质溶液(含0.15mol/L蔗糖,0.025mol/L KCl,0.1mol/L Tris-HCl pH7.4, 0.005mol/L MgCl2),在玻璃匀浆器中匀浆;

2. 15000g×10min离心,弃沉淀,取上清;

3. 100000g×60min离心,弃上清,取沉淀,沉淀即为微粒体;

4. 将微粒体保存在介质溶液中。

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