Q-PCR(定量聚合酶链反应)测定技术及其临床应用
易生物实验 · 2010/03/23
PCR? PCR只是一个简单的不起眼玩艺 ——凯利·穆利斯(Kary Mullis) PCR只是一个概念,所发生的奇迹是:PCR概念变成了可操作的实验系统,变成了一项成熟的技术,后者又上升成为新的概念。 … 它最大的特点就是能不断推出新形式。 —— 摘自[Making

PCR?

PCR只是一个简单的不起眼玩艺

——凯利·穆利斯(Kary Mullis)

PCR只是一个概念,所发生的奇迹是:PCR概念变成了可操作的实验系统,变成了一项成熟的技术,后者又上升成为新的概念。 …

它最大的特点就是能不断推出新形式。

—— 摘自[Making PCR: A Story of Biotechnology by Paul Rabinow]

什么是PCR?

我不认为PCR能够用两种“革命”(政治革命和科学革命)加以说明。……它的发明并没有改变基因操作的本质。有了PCR,我们能在更广的范围内更快、更容易地进行基因操作,学术界也完全不用等到某人死去或退休后才能接受PCR。它只不过是一种新工具。

——凯利·穆利斯(Kary Mullis)

PCR及有关技术的发展历史(1)
1983>>>>>>> Cetus> 公司的 K. Mullis在这年底(12月16日第一次成功实验)发明了PCR。

PCR发明过程的简单回顾

PCR及有关技术的发展历史(2)

1985>>>> 关于PCR 的文章首次由Cetus公司Saiki等人在> Science 上 发 表 (R. Saiki, S. Scharf, F.> Faloona, K. Mullis, G. Horn, H. Erlich and> N. Arnheim)

PCR及有关技术的发展历史(3)
1987>> 当年7月Cetus> 公司在美国获得PCR基本技术专利批准。
成立于1985年底的Perkin-Elmer Cetus仪器公司> ( PECI ) 于这一年的11月推出了第一 个PCR试剂产品及第一台热循环仪。【生物秀实验频道——专业生物实验中心 www.bbioo.com】

1989>> Science 报道了耐热性DNA多聚酶 Taq 酶的>>>> 发现,预示着分子时代的到来。12月《Science》杂志将PCR和它所使用的聚合酶命名为第一个“年度分子”。
Hoffmann-La Roche 公司和Cetus 开 始合作将PCR应用于临床诊断 。

PCR及有关技术的发展历史(4)
1990>>> Cetus科学家 D.Gelfand和S.Stoffel发明了纯 化Taq DNA 多聚酶的方法。
第一个PCR试剂盒用于HLA定量检测分析。
Cetus 科学家H. Erlich 和K. Mullis在德国临床化学领域获得生化分析奖。

1991>>> TaqMan> 技 术 发 表。
当年11月Hoffmann-La Roche公司从Cetus获得全球 的PCR专利权。
Roche Molecular Systems 创建了单一耐热多聚酶rTth 进行RT-PCR技术,并用于临床RNA病毒检测。>>
耐热逆转录酶首次由Cetus科学家发现并报道。
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PCR 及有关技术的发展历史(5)
1992>>> 当年3月Cetus> 公司获得Taq酶、热循环扩增仪等专利;>>>>>>>>>>>>>>>
1993>>> AMPLICOR HCV*首次用于临床RNA PCR 标 准试剂盒。
>>>>>>>>>>> >Kary Mullis 因PCR的发明获得诺贝尔化学奖。

PCR及有关技术的发展历史(6)
九十年代中期PCR临床应用在国内全面展开
1998 年> 实时荧光PCR技术开始在中国较广泛的应用于临床检测
1999年> 西方发达国家尝试将PCR应用于血液筛查

PCR 循环 – 第一步 – 加热变性

PCR 循环- 第二步 – 引物与靶序列退火

PCR 循环 - 第三步 - 引物延伸

第1个 PCR 循环完成后 – 得到两个拷贝的靶序列

PCR扩增过程图示

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