ABI Veriti:真正意义上的温度梯度PCR仪
基因有限公司 · 2012/11/15
自1987年推出第一台PCR仪以来,Applied Biosystems公司就坚持不懈地研发新型PCR仪,以满足研究人员对高品质PCR以的需求。由该公司推出的ABI作为PCR仪中值得信赖的品牌,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。

ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。Veriti系出名门,秉承了一贯的可靠性,并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。

温度梯度PCR仪进展

温度梯度PCR仪最先由Eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercycler Gradient),此后Biometra、MJR、Bio-rad、Thermo等公司相继推出各种型号的温度梯度PCR仪,所采用的技术相差无几。那究竟什么是温度梯度PCR仪呢?可以把一次PCR扩增实验设置成一系列不同的退火温度条件(温度梯度)的实验,这样的仪器就叫梯度PCR仪。设置梯度的主要原因是因为被扩增的不同DNA片段,其最适退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次性PCR反应就可以筛选出表达量最高的最适退火温度,优化实验,进行有效的扩增。梯度PCR仪主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,在节约成本的同时也节约了时间。梯度PCR仪在不设置梯度的情况下也可以做普通PCR扩增,可以说是一台多功能的PCR仪。

常规梯度PCR仪原理

通常梯度PCR仪的热反应模块由分别控温的2组或3组Peltier元件组成,研究者可以设置跨样品基座的退火温度范围,在2组或3组Peltier元件上设置不同的温度,通过热传导在样品基座上形成温度梯度。如图1图2分别为两种不同的在用梯度PCR仪的加热模块。

图1 模块:2块; 图2 模块:6块3组

由于PCR仪是精确控制温度的仪器,PCR反应要求样品基座有最好的温度均一性,样品基座的温度均一性与持续时间高度相关,时间越长,温度均一性越好,温度梯度越难以形成。因此,温度均一性要求与温度梯度形成互相矛盾。对于普通温度梯度PCR仪来说,样品基座上由于热传导的速率和边缘效应,本身会形成孔间温度差异。例如,两组Peltier设定温度分别为55℃和56℃,孔间温度差异为±0.5℃,这样,在同一组Peltier上两孔之间的最大温差为1℃,如图3所示。由于样品基座温度均一性为±0.5℃,所以设置温度梯度间隔在1℃以内意义不大,超过2.5℃则温度跨度太大,最好在1.5~2.5℃范围。并且,普通温度梯度PCR仪是通过热扩散(被动)形成温度梯度,不能准确设置和测定样品基座每一列的温度,退火温度时间设置长短对梯度温度的影响很大。因此,受技术限制,每次温度梯度实验也只有几个孔的数据有意义。



图3 普通梯度PCR仪控温模拟示意图

创新的Veriti多重控温模块

只有具有准确控制样品基座不同区域温度(主动)形成温度梯度的技术才是功能完善的温度梯度PCR仪,才能真正起到优化PCR反应条件的作用,才能将优化PCR反应条件普遍应用,我们ABI Veriti温度梯度PCR仪就完美的做到了这一点。它采用VeriFlex™反应模块,使用6块独立的半导体加热模块,超越温度梯度功能,真正可以优化PCR,控制每个模块设置的温度, VeriFlex™反应模块的6块独立半导体又可以看作是6个可同时独立设置温度的小模块,相邻两个模块的最大设置温差5℃,整个模块的温度跨度为25℃,使得在一次PCR中能够使用6个不同引物(分别在6个Blocks上)。

                                                                                                                                A                                                                               B

C

图4 Veriti温度梯度PCR仪示意图。A:Veriti外观;B:加热模块及实验成果;C:VeriFlex加热模块温度梯度与常规PCR仪温度梯度对比示意图

Veriti温度梯度PCR仪在使用中获得线性梯度,而不是非线性的“S”型曲线,可以达到温度控制的精确性,可实现PCR优化过程中精确的温度控制。Veriti温度梯度PCR仪采用6.5英寸VGA触摸式显示屏进行控制,简化繁琐的编程步骤,使PCR实验变得不再是漫长的等待,更有效的节省了实验时间,同时得到更优异的实验结果,是真正意义上的温度梯度PCR仪。

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