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DPSCs/SHED的原代培养

2010/12/06 来源:武汉原生原代生物医药科技有限公司网站
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导读
DPSCs/SHED的原代培养 Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) 试剂和材料: 1. 无镁和钙的PB

DPSCs/SHED的原代培养

Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED)

Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs)

试剂和材料:

1. 无镁和钙的PBS平衡盐溶液(PBSA);

2. MSC培养基:含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM,添加15%胎牛血清,0.1mmol/L左旋抗坏血酸磷酸盐,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素;

3. Ⅰ型胶原酶;

4. 中性蛋白酶;

5. 免疫磁珠分选时所需试剂;

(1) 含1%BSA的PBSA

(2) 与DPSC反应的一抗,用STRO-1(小鼠抗人MSC;IgM),CC9(小鼠抗人CD146/MUC-18;IgG2a),或3G5(小鼠抗人外膜细胞;IgM)

(3) 羊抗小鼠IgG-结合或大鼠抗小鼠IgM-结合磁珠

6. 培养瓶或培养皿;

7. 手术刀片和刀柄;

8. 70μm细胞滤网;

9. 回转式混合仪;

10. Dynal MPCR-1磁分离器

实验方法:

1. 用手术刀片将牙髓组织切成小碎片;

2. 将剪碎的组织放入胶原酶/中性蛋白酶混合溶液中(1:1);

3. 37℃孵育30―60min,间歇地摇匀组织/消化酶混合物;

4. 消化后,加入足够的MSC培养基,终止酶的活性;

5. 将悬液经70μm细胞滤膜过滤,去除细胞碎片,得到单细胞悬液;

6. 500g离心6min;

7. 倒掉上清液,用MSC培养基重悬细胞。然后进行免疫磁珠分选;

(1) 和能与DPSC细胞反应的一抗孵育,包括STRO-1(小鼠抗人MSC;IgM),CC9(小鼠抗人CD146/MUC-18;IgG2a),或3G5(小鼠抗人外膜细胞;IgM),20μg/ml,冰上孵育1h;

(2) 用含1%BSA的PBSA洗两遍,600g离心6min;

(3) 羊抗小鼠IgG-结合或大鼠抗小鼠IgM-结合磁珠的任意一个二抗孵育,4℃回转式混合仪40min;

(4) 根据产品说明书推荐的方案,通过Dynal MPCR-1磁分离器分离结合磁珠的细胞;

8. 细胞计数,按(1×10)×103个细胞/cm2密度接种到培养瓶或皿上;

9. 在MSC培养基、37℃和5%CO2的培养箱中培养;

10. 细胞分离后7天,用PBSA洗培养瓶,更换培养基。之后可以一周两次更换培养基,直至细胞达到汇合;

来源:武汉原生原代生物医药科技有限公司

联系电话:027-87490190

E-mail:order@pricells.com.cn

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