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从CB-MNCs中分离CD34+细胞

2010/12/20 来源:武汉原生原代生物医药科技有限公司网站
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导读
从CB-MNCs中分离CD34+细胞 试剂和材料: 1. 培养基; 2. 过柱缓冲液:pH7.2的PBSA,添加0.5%牛血清白蛋白和2mmol/L EDTA或0.6%枸橼酸葡萄糖A方(ACD-A)。用真空装置除去缓冲液中的气体; 3. FcR阻断剂; 4. CD34微

从CB-MNCs中分离CD34+细胞

试剂和材料:

1. 培养基;

2. 过柱缓冲液:pH7.2的PBSA,添加0.5%牛血清白蛋白和2mmol/L EDTA或0.6%枸橼酸葡萄糖A方(ACD-A)。用真空装置除去缓冲液中的气体;

3. FcR阻断剂;

4. CD34微球;

5. 柱子(MS+/RS+或LS+/VS+);

6. 磁珠细胞分离仪(如MiniMACS);

7. 尼龙过滤网,30μm;

实验方法:

1. 准备过柱缓冲液,用抽真空装置去除气体;

2. 每108个CB-MNCs用终体积300μl缓冲液重悬;

3. 每108个CB-MNCs悬液加100μlFcR阻断剂,抑制CD34微珠非特异性结合或通过Fc受体介导与非靶细胞的结合;

4. 每108个CB-MNCs悬液加100μlCD34微球进行细胞标记,充分混匀后在6-12℃冰箱放置30min;

5. 加PBSA洗,室温200g离心100min;加适量的缓冲液重选细胞;

6. 根据CB-MNCs的细胞总数选择合适的柱子类型(MS+/RS+或LS+/VS+),将柱子放入MACs分离仪的磁场中,加入缓冲液润洗柱子(MS+/RS+:500μl;LS+/VS:3ml);

7. 用30μm尼龙过滤网过滤细胞,去除细胞团。使用前,用缓冲液湿润柱子;

8. 将细胞悬液加入柱子,使未结合的细胞通过柱子;

9. 用缓冲液将未结合的细胞洗去(MS+/RS+:3×500μl;LS+/VS:3×3ml);

10. 洗脱结合的细胞;

(1) 将柱子从分离仪中移出;

(2) 置于合适的管中;

(3) 将柱子加满缓冲液(MS+/RS+:1ml;LS+/VS:5ml);

(4) 用柱子随带的内塞,加压将结合的细胞冲洗出来;

11. 加PBSA将CD34+细胞洗一遍,室温200g离心10min。用适当的培养基重悬细胞;

来源:武汉原生原代生物医药科技有限公司

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