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饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞

2010/12/27 来源:中国生物器材网
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导读
饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞 试剂和材料: 1. MSCs培养基; 2. 6孔培养板; 3. 丝裂霉素C,100μg/ml; 4. 共培养的培养基:IMDM添加10%FBS,100U/ml青霉素和100μl/ml链霉素; 5. 细胞因子(干细胞因子,IL

饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞

试剂和材料:

1. MSCs培养基;

2. 6孔培养板;

3. 丝裂霉素C,100μg/ml;

4. 共培养的培养基:IMDM添加10%FBS,100U/ml青霉素和100μl/ml链霉素;

5. 细胞因子(干细胞因子,IL-6,Flt-3配体,促血小板生成素);

实验方法:

1. 将脐带血来源的间充质干细胞(CB-MSCs)作为饲养层细胞,用MSCs培养基重悬CB-MSCs,细胞浓度为5×104个细胞/ml;

2. 将CB-MNCs接种到6孔板;

3. 每周两次半量更换新鲜培养基;

4. 当CB-MNCs达到90%以上汇合时,用10μg/ml丝裂霉素C处理,37℃ 2.5h;

5. 用无血清IMDM将CB-MNCs洗两遍;

6. 按1×104/ml CD34+细胞重悬于含细胞因子的共同培养基(100ng/ml干细胞因子,100ng/ml IL-6,50ng/ml Flt-3配体,10ng/ml促血小板生成素);

7. 将CD34+细胞接种到CB-MSCs饲养层细胞上;

8. 每周两次更换1/4培养基;

9. 2周后,收集未贴壁细胞;

来源:武汉原生原代生物医药科技有限公司

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